Музейная экспозиция посвящена жизни и творчеству Д. Н. Мамина-Сибиряка в контексте его связи с семьей, близкими друзьями и этим домом. Речь идет не только о доме, но и о городе Екатеринбурге и об Урале в целом. Именно Мамин смог первым концептуально осмыслить особенности родного края в своих художественных произведениях, сумел, как в зеркале, отразить его уникальность. Он не только обозначил Урал на литературной карте России, став первым его бытописателем, но и поместил в сферу общественного сознания, определив и указав в своем творчестве на неповторимые черты его природы, истории и быта. Местом действия большинства произведений писателя были уральские города и заводы. Дом на Пушкина, 27 – тихий уголок в центре огромного мегаполиса, хранящий память о человеке, который на протяжении многих лет плодотворно работал на благо своего любимого города. Он стал первым историографом Екатеринбурга, написав о нем исторический очерк по заказу городского головы. Писатель смог увидеть те направления развития, что сделали Екатеринбург крупнейшим региональным центром. Дом-музей Мамина-Сибиряка сохраняет атмосферу того времени, когда в небольшом, но быстро развивающемся городке Пермской губернии работал автор выдающихся произведений русской литературы.

В экспозиции музея представлены личные вещи Д. Н. Мамина Сибиряка: часть его библиотеки, предметы из многочисленных коллекций (писатель по натуре был собирателем всевозможных редкостей), предметы быта, мебель. Даже те вещи, что непосредственно не принадлежали писателю, из того времени, когда он жил и творил, поддерживают аутентичную атмосферу дома уральского автора. Главным экспонатом можно считать сам дом, сохранившийся в той же планировке, которую застал Мамин в свой последний приезд в Екатеринбург. В постоянной экспозиции, помимо прочего, представлена картина кисти знаменитого уральского художника А. К. Денисова-Уральского «Река Чусовая», одноименный рисунок авторства самого Мамина, а также рисунок, сделанн-ый его дочерью, Еленой Маминой «Дачный дворик в Павловске».